Opis postupka
1. korak
Mlado neoštećeno lišće kelja treba oprati i osušiti. Odvagnite 0,2025 g bioaktivnog deterdženta i otopite ga u 7,5 mL vode. Otopinu deterdženta i 1 g zelenog lista kelja stavite u tarionik i usitnite tučkom. Biljnu masu s deterdžentom prebacite u dvije kivete za centrifugiranje. Prvu kivetu stavite u sušionik na 40 °C preko noći. Iz druge kivete odmah izolirajte nukleinske kiseline, bez inkubacije. U kivetu dodajte jednak volumen kloroforma, kivetu začepite gumenim čepom i sadržaj miješajte okretanjem kivete 5 minuta. Nakon miješanja sadržaj kivete centrifugirajte na što većem broju okretaja 10 minuta (idealna brzina je oko 10 000 okretaja u minuti).
Izdvajaju se 3 sloja:
- gornji vodeni (sadrži DNA i RNA)
- srednji čvrsti (zeleni, sadrži veće komade tkiva, denaturirane proteine i sl.)
- donji tekući sloj kloroforma (zeleni od klorofila).
2. korak
Gornji vodeni sloj pomoću mikropipete prebacite u čistu kivetu za centrifugiranje. Dodajte 1/10 volumena otopine natrijevog acetata. Okretanjem kivete sadržaj promiješajte. Nakon kratkog vremena može se zamijetiti izdvajanje niti nukleinskih kiselina. Otopinu ponovno centrifugirajte 10 minuta kako bi se na dnu kivete istaložile nukleinske kiseline. Odlijte otopinu natrijevog acetata i etanolom isperite istaložene nukleinske kiseline. Ispiranje se provodi okretanjem kivete. I otopinu etanola odlijte, te talog nukleinskih kiselina posušite. Sušenje se provodi na zraku (5-10 minuta) ili fenom. Suhi talog nukleinskih kiselina otopite u 5 mL sterilne destilirane vode. Sadržaj prebacite u semimikro-epruvetu koja se čuva u zamrzivaču.
3. korak
Isti postupak treba ponoviti s drugom kivetom koja je preko noći inkubirana u sušioniku. Prinos nukleinskih kiselina, kao i njihova čistoća, u ovom je slučaju nešto veći.